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グラム染色(Gram染色)の基本

手順

検体を耳かきひとすくい程度、または爪楊枝ごく少量とる

検体を膜状、または樹枝状に薄く広げる

(尿や髄液はスライドガラスに一滴直接たらしてそのまま広げない)

スライドガラスをドライヤーの熱風で乾かす

30㎝程度離して、裏面からでも可

(バーナーでの火炎固定は省略できる)

バーナーの上を軽く2回通過させる(火炎固定)

クリスタルバイオレット液(青)をかけてて10~30秒

その後背面から洗浄

ルゴール液(茶)で30秒

その後洗浄

アルコールで脱色10~20秒
その後洗浄

サフラニン液(赤)を30秒

その後洗浄

ペーパータオルで表裏の水滴をそっととる

ドライヤーで乾燥


検鏡(肉眼、100倍1000倍)

 

1)グラム陽性球菌(GPC)

・ブドウ球菌、連鎖球菌、グラム陽性双球菌(腸球菌または肺炎球菌)の3タイプに分類

・球菌が4つかたまった「田んぼの田」が複数あれば「ブドウ球菌」

・6連鎖以上あれば「連鎖球菌」

・2連鎖または長くて4連鎖の短い菌は「腸球菌か肺炎球菌」

・腸球菌は横隔膜より足側由来の検体、肺炎球菌は横隔膜より頭側検体由来が多い

・肺炎球菌は周囲に白い莢膜がある

 

2)グラム陰性球菌(GNC)

・モラクセラ、淋菌、髄膜炎菌の3タイプ

・いずれもソラマメ型をした双球菌で見た目からは鑑別できないが、検体で鑑別できる

・肺炎、気管支炎の喀痰や副鼻腔炎の鼻汁では「モラクセラ」

・尿道炎の尿分泌物なら淋菌

・髄液なら髄膜炎菌

 

3)グラム陰性桿菌(GNR)

・「大腸菌、クレブシエラやその類縁」「インフルエンザ桿菌」「緑膿菌やその類縁」の3タイプに分類

・縦横比が1:2~3のソーセージ型なら大腸菌タイプ

・大腸菌より少し大きくて莢膜があればクレブシエラ

・球菌と間違えそうなくらい、大腸菌よりかなり小さい陰性桿菌はインフルエンザ桿菌

・大腸菌よりかなり細い陰性桿菌は緑膿菌タイプ

 

3)多種多様、複数菌種が見える場合

・嫌気性菌の関与やそれによる膿瘍形成など、「嫌気性菌を含む混合感染」を考える

・喀痰であれば誤嚥性肺炎や肺膿瘍を考える

 

 

レジデントノート 2020年5月 Vol.22 No.3 輸液ドリル〜実践に役立つ基本がわかる問題集

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